Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩大

从第一次经常借助于现去甲自身病原体到经常借助于现1HG白血病外科副作用的实质性所部在儿童中期就有很好的揭示，多个去甲自身病原体无副作用的儿童当中有70%在血清归一化后10年内当中风白血病，而随访15年的儿童这一%-减少到84%。相相比较之下，占去外科1HG白血病一半以上的HG1HG白血病的发病程序还并未得到合理的研究课题。

越来越多的人开始用到分期控制系统来并不一定1HG白血病的实质性：生物体在经常借助于现多种去甲自身病原体时转回第1过渡期，经常借助于现血糖极度时转回第2过渡期，经常借助于现副作用时转回第3过渡期。一些多发去甲自身病原体无副作用的生物体，在1期和2期，实质性较更慢，并发展为发病的1HG白血病。我们在此之后揭示了一分组在首次检查到多种去甲自身病原体核查后有数10年无白血病的极更慢实质性者，这分组病征多人少，但形态相当说明。随后，我们发现去甲自身病原体基因表达CD8+T细胞内化学反应在实质性很更慢的病征当中原则上不不存在，但在全面性发病和长期不存在的白血病病征当中很容易检查到。这可能会表明，与实质性病征相相比较，这些病征致病化学反应的调节提升。

更早研究课题表明，尽管调节性T细胞内(Treg)用到量也就是说，但白血病病征不存在一些机能弱点，其当中除此以外对IL-2的化学反应能够降低。此外，白血病病征当中的效应CD4+T细胞内可能会对调节更具抵抗性，观感为效应T细胞内的消除减弱，自然造成的Treg和灌注造成的诱导Treg，以及病原体年当中的CD4+T细胞内当中IL-2化学反应减弱。本研究课题的目的是揭示了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极很更慢实质性者当中的形态，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX研究课题是一项以许多人为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病征亲属当中检查1HG白血病的凶险状况。我们在此之后揭示了长期很更慢实质性者的形态，他们始终保持多重去甲自身病原体无副作用至少10年，但并未经常借助于现白血病的外科副作用，更慢性或非短暂性致病。随后，10名继续始终保持无白血病并不想提供大量血液核查的很更慢实质性者归属于T和B细胞内机能深入研究。在以外的研究课题当中，8名更慢实质性者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身病原体无副作用。所有的举例来说都受制于1HG白血病实质性的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身病原体对某些病原体的无副作用化学反应，然而，一名病征不太可能受制于2期有数6年，但并未经常借助于现外科副作用，一名病征被诊断为白血病，该人脑72岁，在采集科学实验核查时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究当中对该NADP同步进行了实际上分析。分离出来外周血单个核细胞内(PBMCs)，改用多表达式流式细胞内忍术和T细胞内消除试验分析NADP当中Treg的频所部、基因表达和机能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类断定、连续性和紧接)同步进行无监理聚类深入研究，分析Treg基因表达。

结果：与身心健康NADP相相比较，来自更慢实质性体的潜意识CD4+T细胞内的监理聚类看借助于，触发的潜意识CD4+ Treg频所部减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)强调减少有关。一名HbA1c增大的病征与实质性很更慢者和归一化的对照分组相相比较，Treg小曲有所不同。机能深入研究表明，与身心健康NADP相相比较，来自很更慢实质性体的Treg介导的CD4+效应T细胞内消除明显损伤。观感为对效应CD4+T细胞内CD25和CD134强调的消除减少。

由此可知1 深入的基因表达深入研究看借助于，CD4+Treg亚HG在更慢实质性链表当中减少。由FlowSOM转化成的Treg室，群聚在来自所有NADP的来生CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物强调断定借助于10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用到9个不同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个链表象征性一个战斗群(100个战斗群)，大得多的元战斗群(10个元战斗群)在链表分组周围成品。每个链表当中的甜品由此可知回应单个上面的强调级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以看借助于适度上面强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成由此可知，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较同位素为每个metacluster箱支线由此可知(同位素> 0.05%)确认为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。橘色左上角象征性人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模HG声称，Treg频所部的减少是实质性很更慢的标志。评定奈斯(a - f)和大豆深入研究(g-k)相比较SP举例来说和归一化的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的象征性性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR强调同步进行分离出来，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(布氏)分组以及NADPSP 606(橘色)当中CD25+ cd127的频所部概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯邻域的箱支线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度可视，上标突借助于的簇被标记为SP和HD链表之间的不同。(j)箱支线由此可知看借助于了在SP(布氏)和HD(灰点)分组当中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较同位素(%-)。(k)直方由此可知看借助于每个簇的基因表达(粉红色)和Treg上面相较强调与背景强调(金色);上列，磁盘Treg_3;下面几天后，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇当中上面的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

由此可知3 与身心健康献血者相相比较，实质性很更慢者潜意识treg的GITR减少。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个强调上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的强调热由此可知(sp606不除此以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR强调串连，看借助于直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(橘色)所有NADP除此以外，p< 0.05(金色)NADPSP 606和归一化的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR强调，从评定奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)串连，看借助于直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

由此可知4 来自很更慢实质性的CD4+ treg细胞内控制效应CD4+T细胞内的能够降低。SP分组用金色的支线和左上角回应，HD分组用黑色的支线和左上角回应，橘色的支线/左上角回应NADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培养出来3同月同步进行流式细胞内忍术检查。(a-d)与CD4+需要的话者相较应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用到无副作用对照(触发的积极响应细胞内不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

由此可知5 效应CD4+T细胞内对很更慢实质性的T细胞内诱导的消除更敏感性。SP分组用金色的支线和左上角回应，HD分组用黑色的支线和左上角回应，橘色的支线/左上角回应NADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上面，treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培养出来3同月同步进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者都由培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除%-(b)。(c,d) CD25消除%-(c)和CD134消除%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来当中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

论据：我们得借助于的论据是，来自很更慢实质性子的诱导潜意识CD4+Treg在GITR强调当中得到了扩充和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1HG白血病风险生物体当中的关联性的必要性。

原意借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28