Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现造出胰脏自身HIV到显现造出1DF高血压流行病学病症的困难重重率在老年人初就有不太好的叙述，多个胰脏自身HIVHIV的老年人里有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的老年人这一比例增加到84%。即便如此，九成流行病学1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的确诊功能还没有人获得充分的科研人员。

越来越多的人开始适用分期侄系统来定义1DF高血压的困难重重：母体在显现造出多种胰脏自身HIV时离开第1阶段，显现造出血糖反常时离开第2阶段，显现造出病症时离开第3阶段。一些多发胰脏自身HIVHIV的母体，在1期和2期，困难重重较慢，并发展为确诊的1DF高血压。我们之前叙述了一四组在首次样品到多种胰脏自身HIV结果推断后至极少10年无高血压的极慢困难重重者，这四组病患者人数极少，但形态非常指明。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞特异性CD8+T细胞会反可不在困难重重加速的病患者里基本不不存在，但在近期确诊和长期以来不存在的高血压病患者里很容易样品到。这可能表明，与困难重重病患者相比，这些病患者自身免疫反可不的适度增强。

早期科研人员表明，尽管适度性T细胞会(Treg)数量正常，但高血压病患者不存在一些功能缺点，其里仅限于对IL-2的反可不意志力减极少。此外，高血压病患者里的现象CD4+T细胞会可能对适度更具抵抗性，表现为现象T细胞会的抑止增强，自然环境转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞会里IL-2反可不增强。本科研人员的目的是叙述了CD4+适度性T细胞会(Treg)在一小群极加速困难重重者里的形态，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

法则：BOX科研人员是一项以人群依此的横向科研人员，在21岁表列确诊的病患者亲属里检查1DF高血压的致命因素。我们之前叙述了长期以来加速困难重重者的形态，他们保持多重胰脏自身HIVHIV超过10年，但没有人显现造出高血压的流行病学病症，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名一直保持无高血压并愿意提供大量血浆结果推断的加速困难重重者纳入T和B细胞会功能数据分析。在目前的科研人员里，8名慢困难重重者(SP四组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身HIVHIV。所有的行动者都位处1DF高血压困难重重的1期，尽管一些人随后无法控制了胰脏自身HIV对某些上皮细胞的HIV反可不，然而，一名病患者早已位处2期至极少6年，但没有人显现造出流行病学病症，一名病患者被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验结果推断时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在科研人员里对该酪氨酸开展了单独评估。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，改用多参数流式细胞会绝技和T细胞会抑止试验评估酪氨酸里Treg的频率、性状和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无行政官员聚类数据分析，评估Treg性状。

结果：与肥胖酪氨酸相比，来自慢困难重重体的心灵CD4+T细胞会的行政官员聚类推断，诱导的心灵CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素诱导的TNFR相关肽(GITR)暗示增加有关。一名HbA1c增高的病患者与困难重重加速者和匹配的对可不四组相比，Treg明人有所相异。功能数据分析表明，与肥胖酪氨酸相比，来自加速困难重重体的Treg介导的CD4+现象T细胞会抑止明显受损。表现为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134暗示的抑止增加。

上图1 险恶的性状数据分析推断，CD4+Treg亚DF在慢困难重重队列里增加。由FlowSOM生成的Treg室，挤满在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标上物暗示鉴定造出10个元簇:心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在键值四组外围上色。每个键值里的饼上图暗示单个标上的暗示级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整体而言标上暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)即便如此丰度为每个metacluster盒两条路线上图(丰度> 0.05%)相符为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞会(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞会(l)。粉红色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模DF证实，Treg频率的增加是困难重重加速的标志。PG依赖型(a - f)和果树数据分析(g-k)尤其SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR暗示开展分离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(白斑)和SP(黑纹)四组以及酪氨酸SP 606(粉红色)里CD25+ cd127的频率汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型侄集的盒两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示风速着色，箭头突造出的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的相异。(j)盒两条路线上图推断了在SP(黑纹)和HD(灰点)四组里，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的即便如此丰度(比例)。(k)直方上图推断每个簇的性状(粉红色)和Treg标上即便如此暗示与氛围暗示(黄色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇里标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

上图3 与肥胖献血者相比，困难重重加速者心灵treg的GITR增加。每个心灵CD4+T细胞会元簇(心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个暗示标上的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热上图(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR暗示串联，推断直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(粉红色)所有酪氨酸仅限于，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不仅限于在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从PG依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)串联，推断直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

上图4 来自加速困难重重的CD4+ treg细胞会支配现象CD4+T细胞会的意志力减极少。SP四组用黄色的两条路线和左上方暗示，HD四组用黑色的两条路线和左上方暗示，粉红色的两条路线/左上方暗示酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标上为CFSE, Treg按推论的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3天后开展流式细胞会绝技样品。(a-d)与CD4+这样的话者即便如此可不的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。适用HIV对可不(诱导的响可不细胞会包含treg)量化抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

上图5 现象CD4+T细胞会对加速困难重重的T细胞会转化的抑止更敏感。SP四组用黄色的两条路线和左上方暗示，HD四组用黑色的两条路线和左上方暗示，粉红色的两条路线/左上方暗示酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标上，treg按推论的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3天后开展流式细胞会绝技(CD25反染)和细胞会因侄数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

假设：我们得造出的假设是，来自加速困难重重侄的转化心灵CD4+Treg在GITR暗示里获得了扩展和丰富，强调了进一步科研人员Treg在1DF高血压风险母体里的值得注意的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28